Lab 8B: DNA Extraction

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At Lab 8A

Post-lab

  • Purpose
입안 상피세포의 DNA Extraction 하는 방법과 원리를 안다.
DNA Extraction에 쓰이는 buffer와 proteinase, sodium acetate의 역할을 이해한다.
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  • Discussion
1. lysis buffer의 역할
  Tris : 세포가 파괴되면서 세포소기관이 용액으로 녹아든다. 이때 pH변화가 일어나는데 이러 인해 DNA가 파괴되지 않도록 하는 pH buffer이다.
  EDTA : DNase activity를 활성 방해하는 DNase가 작동하기 위해서는 cofactor가 필요한데, 그 cofactor를 잡아주는 역할을 한다.
   SDS : 1 세포벽의 지질을 물에 녹여 세포를 파괴한다. 2. proteinase가 folding 되어 있지 않은 protein에서 더 잘 작동하기 떄문에 SDS가 protein을 denature함으로써 proteinase가 잘 작동할 수 있도록 한다.
2. Protease : 관찰하기 원하는 것은 DNA이므로 protein을 분해하게 한다. 그리고 DNA를 뭉치게 하는 histon 단백질을 분해하여 DNA 만 Extraction 되도록 한다.
3. 3M sodium acetate, pH 5.2 : Na+를 제공하여 DNA에 binding하게 한다. DNA는 원래 negative charge를 가져서 hydrophilic하고 DNA들 끼리 밀어내게 한다. Na+를 가해주어 DNA의 solubility 도 낮아지고, DNA들끼리 잘 뭉칠 수 있게 되어 DNA를 용액에서 추출할 수 있다.
4. Cold Ethanol : DNA는 ethanol에 녹지 않는다. 갖가지가 섞인 solution에 Ethanol을 살살 넣어 천천히 solution과 맞닿게 하여 DNA가 실처럼 추출될 수 있도록 한다. 찬 상태의 Ethanol을 쓰는 이유는 온도차로 인해 solution과 바로 섞이지 않고 층을 만들어 내기 위함이다.
  • Reference

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